La reacción en cadena de la polimerasa PCR es un método simple y omnipresente en biología molecular para amplificar segmentos de ADN en millones de copias. Esto es importante no solo para la investigación básica, sino también en diagnósticos, análisis forenses y aplicaciones médicas. Tiempo cuantitativo en tiempo realLa PCR es una versión modificada que incorpora etiquetado de fluorescencia para medir de forma acumulativa la amplificación de ADN, en lugar de monitorearla al final del proceso, como en la PCR convencional. Por lo tanto, la PCR en tiempo real permite una cuantificación sensible de la cantidad de la plantilla de ADN inicial.Las técnicas actuales pueden introducir sesgo a través de errores de secuencia, inexactitudes de pipeteo o unión desigual de sondas fluorescentes hibridación.
Un equipo de investigación centrado en la Universidad de Nagoya ha desarrollado un método novedoso para medir la amplificación de ADN en tiempo real sin etiquetas, evitando así los problemas de sesgo asociados con otros procedimientos. La investigación y sus resultados se informaron en Informes científicos .
Los sistemas de detección sin etiquetas existentes dependen de la inmovilización de la superficie de las moléculas diana, lo cual es costoso, laborioso e ineficaz con el tiempo. Este nuevo método también introduce un elemento de sesgo de hibridación debido a la unión complementaria de la sonda. La nueva técnica en cambio detecta cambios enLa intensidad de la luz difractada de un rayo láser que pasa a través de minúsculos nanocanales de 200 nm 0.0002 mm de ancho llenos de muestras analíticas de líquidos. El rayo láser de 532 nm es enfocado por una lente y luego difractado al pasar a través del nanocanal y detectado por unfotodiodo.Se usaron sustratos de sílice para hacer los nanocanales, y cuanto mayor es la diferencia entre los índices de refracción de los líquidos de muestra y sílice, menor es el cambio en la intensidad de la luz difractada, y viceversa.
"Utilizamos esta técnica para proporcionar la primera detección sin etiqueta del virus del papiloma humano y las bacterias responsables de la tuberculosis", dice el primer autor Takao Yasui. "El método es altamente sensible y permite la cuantificación de un amplio rango de concentraciones iniciales de ADN", de 1 fM a 1 pM un rango de 1,000 veces, por lo que es superior a los sistemas de detección basados en fluorescencia existentes ".
"Nuestro sistema también mide la amplificación de ADN a una temperatura relativamente baja de 34 ° C y sin la necesidad de ciclos térmicos", dice el coautor Noritada Kaji. "Porque tiene el potencial de construirse como un solo chip y puede detectar volúmenes de muestratan pequeño como 1 μl, que es 100-1,000 veces menos de lo que son capaces los detectores convencionales, es particularmente adecuado para el desarrollo como una forma miniaturizada de diagnóstico y detección de microbios ".
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Materiales proporcionados por Universidad de Nagoya . Nota: El contenido puede ser editado por estilo y longitud.
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