Ya sea que revele a un perpetrador con evidencia de ADN, diagnostique un patógeno, clasifique un descubrimiento paleontológico o determine la paternidad, la duplicación de ácidos nucleicos amplificación es indispensable. En la revista Angewandte Chemie , los científicos ahora han introducido un método nuevo, muy simple, pero altamente sensible y confiable que evita los pasos habituales de calentamiento y enfriamiento, así como instrumentos complicados. Los reactivos se pueden liofilizar, permitiendo que este método universal se use afueradel laboratorio
El método de amplificación más utilizado es la reacción en cadena de la polimerasa PCR, que se basa en la repetición de múltiples ciclos térmicos en instrumentos especiales que tienen una gran demanda de potencia. Es difícil de realizar fuera del laboratorio, en unlado de la cama del paciente o en una ubicación remota, por ejemplo. Los métodos alternativos sin ciclos térmicos son a menudo complicados o no lo suficientemente sensibles, requieren reactivos costosos o no son ampliamente aplicables.
Los investigadores que trabajan con Bin-Cheng Yin y Bang-Ce Ye en la Universidad de Ciencia y Tecnología de China Oriental, Shanghai, China, ahora han desarrollado un método nuevo y económico: llamado reacción de amplificación basada en Cas9n Cas9nAR, que consiste enUn solo paso en solución homogénea, y tiene lugar a una temperatura constante de 37 ° C.
En este enfoque, los investigadores usan componentes del "sistema inmune" de las bacterias. Cuando las bacterias son infectadas por un virus, por ejemplo, cortan el material genético extraño en pequeños pedazos y los introducen en áreas específicas de su propio genoma.En el caso de una infección posterior, las cadenas de ARN de la bacteria "reconocen" estas secuencias y dirigen "tijeras genéticas" especiales para cortar el ADN extraño. Estas herramientas también se han empleado en la ingeniería genética moderna.
Yin, Ye y sus compañeros de trabajo han alterado la tijera genética conocida como Cas9 para que ya no corte completamente el ADN. En cambio, corta solo una hebra e introduce un "corte". Este tipo de enzima se llamauna "nickase". Al igual que en el sistema bacteriano, la casase nickase se une a una cadena de ARN, que determina la ubicación del nick. Este ARN se puede hacer de modo que reconozca una secuencia de ADN característica de un patógeno, por ejemplo.luego corta el ADN inmediatamente adyacente.
Para la nueva técnica, los investigadores produjeron dos complejos diferentes de ARN-nickasa de ARN, que cortan el ADN en dos lugares diferentes. Una polimerasa comúnmente utilizada en PCR exo ? Klenow polimerasa complementa la cadena de corte comenzando en el primer corte,liberando la hebra vieja, pieza por pieza, hasta que alcanza el segundo corte. El ADN recién completado se corta repetidamente y se complementa con el complejo de la nickasa. Las cadenas cortas cortas que libera este proceso se convierten en el punto de partida para una mayor amplificación en un segundo ciclo.Además del complejo de nickase y la polimerasa, lo único que se requiere son dos cebadores adecuados como puntos de partida para las copias.
Las pruebas con un fragmento de ADN genómico bacteriano demostraron que la secuencia diana se reconocía y amplificaba con precisión. En un volumen de 20 μl, era posible detectar una sola molécula. Las diferencias de un solo nucleótido dentro de un gen podían detectarse con altaespecificidad
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Materiales proporcionados por Wiley . Nota: El contenido puede ser editado por estilo y longitud.
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