Se ha informado sobre un protocolo simplificado para un método alternativo de inserción de genes que utiliza tecnologías de edición del genoma, el sistema PITCh Integración precisa en el cromosoma objetivo Protocolos de la naturaleza por el profesor especialmente designado Tetsushi Sakuma, el profesor Takashi Yamamoto, el profesor asociado especialmente designado Ken-Ichi T Suzuki y sus colegas de la Universidad de Hiroshima, Japón.
El sistema PITCh es más conveniente y efectivo que los métodos existentes para insertar ADN extraño en lugares genómicos específicos mediante el uso de herramientas de edición del genoma. Esta nueva técnica versátil puede ayudar a la rápida progresión de la investigación en campos tales como la detección de nuevos candidatos a fármacos y la creación demodelos celulares o animales de enfermedades humanas.
La edición del genoma es una técnica innovadora utilizada en ingeniería genética que permite a los investigadores modificar el genoma no al azar sino en un objetivo particular. En esta técnica, los investigadores emplean nucleasas diseñadas como "tijeras moleculares", que crean roturas de ADN en los lugares deseados enel genoma. Cuando las roturas de ADN se reparan mediante vías de reparación, se inducen modificaciones genéticas que incluyen la inserción de ADN extraño en el genoma knock-in y la sustitución o eliminación de un locus genómico dirigido.
"El sistema PITCh es un método alternativo independiente que es independiente de la recombinación homóloga HR, una de las vías de reparación de ruptura de ADN, a diferencia de las técnicas existentes que utilizan herramientas de edición del genoma como TALEN o CRISPR-Cas9, queprincipalmente utilizan la FC ", dijo el Dr. Sakuma." Las técnicas existentes no pueden aplicarse a todos los tipos de células y organismos debido a las frecuencias variables de la FC. Por lo tanto, apuntamos a otra vía de reparación, la unión final mediada por microhomología MMEJ, y desarrolló el sistema PITCh. "
En este artículo, describimos procedimientos detallados para construir un vector deseado, transfectarlo en células, seleccionar células intercaladas y verificar después de la inserción junto con un ejemplo exitoso real. Además, un método simplificado de inserción de genes en embriones de rana estambién descrito. Este artículo permitirá a los investigadores utilizar esta poderosa herramienta fácilmente y contribuirá al progreso no solo de la investigación básica sino también aplicada en las ciencias de la vida.
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Materiales proporcionados por Universidad de Hiroshima . Nota: El contenido puede ser editado por estilo y longitud.
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