Los hepatocitos humanos aislados son herramientas esenciales en la investigación preclínica y clínica del hígado, pero la calidad celular es muy variable. Ahora, los investigadores de la Universidad de Uppsala han ideado un protocolo simple que mejora la calidad de los hepatocitos y permite que las células de un espectro de calidad más amplio se usen de manera estándary cultivo celular avanzado. Los hallazgos se publican en Archivos de Toxicología .
Los hepatocitos son responsables de la desintoxicación de la sangre, y constituyen alrededor del 80% del volumen del hígado. Se usan ampliamente en experimentos de laboratorio, como estudios de absorción de drogas, metabolismo y toxicidad. Los hepatocitos humanos recién aislados no están disponibles regularmente,sin embargo, ya que solo pueden ser preparados por laboratorios altamente especializados. Por lo tanto, los investigadores confían en las células congeladas crioconservadas para garantizar un acceso continuo. Desafortunadamente, congelar y descongelar células de mamíferos es muy estresante y con frecuencia resulta en la pérdida de la función.
"El estrés celular asociado con el aislamiento y la congelación afecta a los hepatocitos, y muchas células están demasiado dañadas para recuperarse completamente después de descongelarse. Cuando se dañan demasiadas células, se vuelven prácticamente inútiles para la mayoría de las aplicaciones", dice Magnus Ölander,estudiante de doctorado en el grupo de entrega de medicamentos encabezado por el profesor Per Artursson en la Universidad de Uppsala.
El grupo de investigación utilizó espectrometría de masas de última generación para comparar la expresión de miles de proteínas en hepatocitos dañados y sanos, y descubrió que el daño implicaba apoptosis, una forma controlada de muerte celular.
"A través de un análisis más detallado, notamos que las células dañadas se encontraban principalmente en las primeras etapas de la apoptosis. Razonamos que si pudiéramos encontrar una manera de disminuir temporalmente el estrés, podríamos darles a las células la oportunidad de recuperarse", diceMagnus Ölander.
Por lo tanto, los investigadores trataron los hepatocitos con diferentes compuestos reductores del estrés y descubrieron que el daño podría revertirse utilizando un inhibidor de apoptosis específico. En base a estos hallazgos, diseñaron un protocolo de restauración simple que mejora la calidad de las preparaciones de hepatocitos humanos subóptimoshasta el punto de que pueden usarse para la mayoría de las aplicaciones, con una funcionalidad restaurada en términos de absorción de drogas, metabolismo y toxicidad.Esta es la primera vez que los hepatocitos humanos de calidad subóptima han sido 'rescatados' del estado de congelación, que previamentesido considerado un esfuerzo inútil.
"Otro aspecto novedoso es la naturaleza transitoria de nuestro enfoque. El inhibidor solo se usa por un corto tiempo después de la descongelación, y no necesita ser incluido en el medio de cultivo celular. Predecimos que nuestro protocolo puede aumentar dramáticamente la disponibilidad dehepatocitos humanos de alta calidad, ya que los hepatocitos humanos subóptimos se pueden encontrar en congeladores profundos en laboratorios de todo el mundo. Esto finalmente le dará a la comunidad científica un mejor acceso a estas células importantes ", dice Magnus Ölander.
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Materiales proporcionado por Universidad de Uppsala . Nota: El contenido puede ser editado por estilo y longitud.
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