Visualizar los componentes y procesos celulares a nivel molecular es importante para comprender la base de cualquier actividad biológica. Las proteínas fluorescentes FP son una de las herramientas más útiles para investigar la dinámica molecular intracelular.
Sin embargo, los FP tienen limitaciones de uso para la obtención de imágenes en entornos de pH bajo, como en orgánulos ácidos, incluidos endosomas, lisosomas y vacuolas de plantas. En entornos de pH inferior a 6, la mayoría de los FP pierden su brillo y estabilidad debido a su p neutral K a . P K a es la medida de la fuerza del ácido; cuanto menor es la p K a es decir, cuanto más ácida es la sustancia.
"Aunque hay informes de varios PF verdes tolerantes al ácido GFP, la mayoría tiene serios inconvenientes. Además, hay una falta de GFP tolerantes al ácido que sean prácticamente aplicables a la bioimagen", dice Hajime Shinoda, autor principal de unEstudio de la Universidad de Osaka que tuvo como objetivo diseñar GFP monomérico tolerante al ácido que sea prácticamente aplicable a la obtención de imágenes de células vivas en orgánulos ácidos. "En el estudio actual, desarrollamos un GFP tolerante al ácido. Lo llamamos Gamillus".
Gamillus es un clonado de GFP Olindias formosa medusa con sombrero de flores y exhibe una tolerancia superior al ácido p K a = 3.4 y casi el doble de brillo en comparación con las GFP informadas.El espectro de fluorescencia es constante entre pH 4,5 y 9,0, que se encuentra entre el rango intracelular en la mayoría de los tipos de células.La cristalografía de rayos X una técnica utilizada para determinar la estructura atómica y molecular de un cristal, en este caso, un cristal de Gamillus y la mutagénesis puntual sugieren que la tolerancia ácida de Gamillus se atribuye a la estabilización de la desprotonación en su estructura química.Los hallazgos fueron publicados en Biología química celular .
"La aplicabilidad de Gamillus como etiqueta molecular se demostró mediante el patrón de localización correcto de las fusiones de Gamillus en una variedad de estructuras celulares, incluidas aquellas que son difíciles de apuntar", dice el autor correspondiente Takeharu Nagai. "Creemos que Gamillus puede ser unpoderosa herramienta molecular para investigar fenómenos biológicos desconocidos que involucran orgánulos ácidos, como la autofagia ".
Fuente de la historia :
Materiales proporcionado por Universidad de Osaka . Nota: el contenido se puede editar por estilo y longitud.
Referencia de la revista :
cite esta página :