Los cuerpos de Lewy y las neuritas de Lewy se encuentran en los cerebros de los pacientes con enfermedad de Parkinson EP. Consisten principalmente en fibrillas de la proteína alfa-sinucleína α-Syn, que se autoensambla en fibrillas in vitro.En el cuerpo humano, estas semillas pueden actuar como priones y desencadenar la formación de depósitos de proteínas tóxicas. Debido a que las fibrillas α-Syn a menudo se usan en la investigación, es importante que no se transfieran accidentalmente a humanos o cultivos celulares. Revista de la enfermedad de Parkinson describa tres procedimientos de limpieza que eliminen y desarmen efectivamente estas semillas de α-sinucleína.
α-Syn se purifica y ensambla en tubos de ensayo en fibrillas que se utilizan para investigar / imitar la patogénesis de la EP en animales modelo que van desde gusanos c. Elegans hasta roedores y primates no humanos en una gran cantidad de laboratorios. Estos laboratoriostípicamente contienen superficies y artículos no desechables hechos de plástico, vidrio, aluminio o acero inoxidable. Estos artículos a menudo son ásperos, con áreas que no se pueden limpiar completamente con una toallita. Por lo tanto, es importante minimizar la contaminación mediante procedimientos de limpieza efectivos.
"Varios equipos, incluido el nuestro, demostraron que el α-Syn fibrilar se propaga de una célula, incluidas las neuronas, a otra y se amplifica durante este proceso de propagación imitando el comportamiento de las partículas de priones. Estas observaciones sugieren que el α-Syn fibrilar no es inocuo", explicóinvestigador principal Ronald Melki, PhD, Director de Investigación en el Instituto de Neurociencias Paris-Saclay, CNRS, Gif-sur-Yvette, Francia.
Los investigadores aplicaron una solución de fibrillas marcadas con fluorescencia y cintas de α-Syn a superficies rugosas que imitaban las condiciones de laboratorio. Las gotas eran fácilmente visibles para el ojo y podían evaluarse por su fluorescencia.
Se probaron cinco soluciones de limpieza: 1 hipoclorito de sodio 20,000 ppm;2 hidróxido de sodio 1N, 3 dodecilsulfato de sodio SDS, 1%, W / V;4 Hellmanex 1%, V / V;y 5 TFD4 1%, V / V.Como control, las superficies se lavaron con agua pura preparada comercialmente.Después de la limpieza, se midió por fluorescencia la cantidad de pequeños conjuntos, fibrillas y cintas de α-Syn que quedaban en las superficies.Para evaluar si las fibrillas α-Syn que se lavaron de las superficies se destruyeron, se incubaron fibrillas y cintas en las diversas soluciones de limpieza durante una hora y se midió la cantidad de fibrillas restantes.
Los investigadores descubrieron que los detergentes comerciales Hellmanex y SDS 1%, W / V son los reactivos de limpieza más adecuados para la eliminación y neutralización de semillas de α-SYN de superficies contaminadas. Sin embargo, las soluciones de hipoclorito de sodio 20,000 ppmo hidróxido de sodio 1N, previamente demostrado que disminuye la infectividad del prión, no fueron efectivos. El agua corriente fue igualmente ineficaz.
Como resultado de esta investigación, los equipos de investigación han implementado "Procedimientos operativos estándar de laboratorio para fibrilar α-Syn" para minimizar la posible contaminación. Esto incluye un procedimiento de limpieza que elimina y desmonta las fibrillas α-Syn adsorbidas en plástico, vidrio, aluminio, o superficies de acero inoxidable, así como los procedimientos de eliminación recomendados para diversas formas de residuos de α-Syn. Este método de limpieza es lo suficientemente suave como para permitir la descontaminación eficiente de herramientas no desechables en un laboratorio.
"Concluimos que los procedimientos de limpieza que dependen del uso de detergentes que son compatibles con la mayoría de las herramientas no desechables en un laboratorio son fáciles de implementar y muy recomendables cuando se trabaja con α-Syn fibrilar en un entorno de laboratorio", afirmó el co-investigadorPatrik Brundin, MD, PhD, Editor en Jefe de la Revista de Enfermedad de Parkinson y Director del Centro de Ciencias Neurodegenerativas en el Instituto de Investigación Van Andel en Grand Rapids, Michigan.
"Los procedimientos que describimos eliminan e inactivan los conjuntos fibrilares de α-Syn a un nivel en el que son indetectables, lo que mejora significativamente la seguridad de los investigadores al manipular el α-Syn fibrilar. Se necesita más trabajo para establecer la unidad infecciosa del α-Syn recombinantey la eficiencia biológica de la limpieza ", agregó el coinvestigador Luc Bousset, PhD, en el Instituto de Neurociencias Paris-Saclay, CNRS.
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