El síndrome de X frágil, la causa hereditaria más común de discapacidad intelectual y una causa frecuente de autismo, se caracteriza por anomalías del gen FMR1 que son difíciles de analizar. Los estudios preclínicos de X frágil y los trastornos relacionados con X frágil se ven obstaculizados porLa falta de métodos de bajo costo y sensibles pero simples. Los investigadores de los Institutos Nacionales de Salud NIH han desarrollado un conjunto de ensayos que son robustos, lo suficientemente baratos como para el uso de investigación de rutina, y pueden ser adecuados para la detección inicial del paciente, según unnuevo informe en El diario de diagnósticos moleculares .
Los trastornos relacionados con X frágil resultan de la expansión de un tracto de repetición de trinucleótido hipervariable y propenso a la metilación en el gen FMR1. Los pacientes con síndrome de X frágil generalmente tienen más de 200 repeticiones, mientras que las personas con 55 a 200 repeticiones tienen riesgo deInsuficiencia ovárica primaria asociada a X frágil y síndrome de ataxia / temblor asociado a X frágil.
"El análisis cuidadoso del número total de repeticiones, el número de interrupciones en el tracto de repetición y el estado de metilación del gen FMR1 es importante para una comprensión adecuada del riesgo de un individuo de transmitir alelos más grandes a su descendencia y a su descendenciariesgo personal de patología de la enfermedad. También es fundamental para abordar una serie de preguntas de investigación importantes ", explicó Karen Usdin, PhD, investigadora principal y jefa de la Sección de Estructura y Enfermedades Genéticas, Laboratorio de Biología Celular y Molecular, Instituto Nacional de Diabetes yEnfermedades digestivas y renales, NIH Bethesda, MD.
Los nuevos ensayos tienen la capacidad de amplificar alelos con hasta aproximadamente 1,000 repeticiones, incluso en muestras de pacientes que son mosaicos, es decir, que tienen una mezcla de células con diferentes números de repetición. Los ensayos son lo suficientemente sensibles como para analizar muestras de saliva conpurificación mínima. Las pruebas se pueden completar en un plazo similar al de los ensayos de diagnóstico comerciales recientes menos de 24 horas para determinar el tamaño de repetición y / o el estado de metilación, menos de 24 horas para determinar el estado de interrupción y el porcentaje de metilación y son comparables entérminos de tiempo práctico requerido. Estos ensayos permiten detectar incluso pequeños cambios en la metilación del ADN, lo que los hace útiles en la búsqueda de nuevos medicamentos para revertir los efectos de la expansión repetida.
"Los ensayos básicos para el número de repeticiones, el estado de metilación y el número de repeticiones ininterrumpidas cuestan menos de $ 5, la marca generalmente se considera el umbral para el cribado basado en la población", dijo Bruce Hayward, PhD, investigador principal en el laboratorioof Cell and Molecular Biology y el primer autor del informe.
Para desarrollar estos ensayos, los investigadores modificaron un ensayo de PCR establecido que era capaz de dimensionar solo alelos pequeños para permitirle dimensionar alelos más grandes ". Al darse cuenta de la utilidad potencial más amplia del ensayo de dimensionamiento, ampliamos sus capacidades para incluir tanto la metilacióny estado de interrupción. Mostramos que estos ensayos funcionan de manera sólida incluso en las situaciones más difíciles ", dijo el Dr. Hayward.
Los investigadores esperan que estos ensayos sean utilizados por muchos laboratorios que estudian los eventos asociados con el desarrollo embrionario temprano y el efecto de la duración de repetición y el estado de metilación en la expresión y diferenciación de genes ". Sin la capacidad de verificar el número de repetición CGG yestado de metilación, es imposible distinguir entre cambios de buena fe regulados por el desarrollo y artefactos que surgen de la inestabilidad en el número de repeticiones y la metilación comúnmente asociada con estas células ", dijo el Dr. Usdin.
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Materiales proporcionados por Ciencias de la salud de Elsevier . Nota: El contenido puede ser editado por estilo y longitud.
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