Los científicos de JILA han desarrollado un método de preparación de muestra rápido y simple que mejora la obtención de imágenes del ADN para analizar mejor sus propiedades físicas e interacciones.
Descrito en ACS Nano , el proceso suave pero efectivo de JILA implica la unión del ADN a la mica, un mineral de silicato plano. Este proceso extiende la configuración del ADN, similar a la expansión del fuelle de un acordeón, de modo que se puede analizar ocho veces más de la molécula comoen comparación con los métodos anteriores.
Las imágenes de microscopía de fuerza atómica AFM de las estructuras extendidas en líquido mejoraron la calidad y cantidad de datos biofísicos sobre el ADN y sus interacciones con las proteínas. El método produjo imágenes de alta calidad en una amplia gama de concentraciones de sal, incluidas las similares alos que se encuentran en una célula. Anteriormente se pensaba que era imposible porque diferentes sales normalmente compiten para unir el ADN a la superficie o interferir con esa unión. Las imágenes de alta resolución revelaron la icónica estructura de doble hélice del ADN, que parece una escalera retorcida.
JILA es operado conjuntamente por el Instituto Nacional de Estándares y Tecnología NIST y la Universidad de Colorado Boulder.
"Esperamos que este nuevo método de preparación de muestras allane el camino para ajustar la fuerza de unión del ADN a una superficie, lo que debería facilitar el estudio de la dinámica de los complejos de proteína-ADN", dijo el compañero de NIST / JILA, Tom Perkins.
Las imágenes AFM de ADN se han realizado previamente tanto en aire como en líquido, pero no existe un método ampliamente aceptado para preparar ADN en líquido, su entorno normal. La mica es una superficie de unión atractiva porque es muy plana, pero también tiene uncarga eléctrica negativa, que repele el ADN, por lo que se necesitan tratamientos superficiales. Los métodos actuales de preparación de muestras pueden dar como resultado piezas muy compactas de ADN, imágenes deficientes o condiciones salinas que interrumpen las interacciones proteína-ADN.
El proceso de cinco minutos de JILA incluye remojar previamente la mica en una solución de sal de níquel, enjuagar y secar suavemente y unir el ADN a la mica en una solución que contiene cloruro de magnesio y cloruro de potasio. Como en una célula, estas condiciones de salpreservar las propiedades de las proteínas que se unen al ADN. Después de que los complejos de proteína-ADN se unen a la mica, el paso final antes de la imagen consiste en enjuagar la mica con una solución que contiene cloruro de níquel, que atrapa la estructura del ADN al aumentar la fuerza de interacción ADN-mica.
Por primera vez en líquido, el método produjo imágenes AFM de ADN unido a la superficie plana sin ninguna alteración a sus propiedades mecánicas bien conocidas, incluyendo su ancho, longitud y rigidez de la columna vertebral nativa. Los científicos de JILA utilizaron el nuevo método para hacerImágenes de alta calidad de ADN y dos complejos de ADN-proteína. Las imágenes mejoradas de los complejos de ADN-proteína ayudarán a los investigadores a ver nuevos detalles de procesos como la reparación del ADN y el metabolismo celular.
Fuente de la historia :
Materiales proporcionado por Instituto Nacional de Estándares y Tecnología NIST . Nota: El contenido puede ser editado por estilo y longitud.
Referencia del diario :
Cite esta página :